贯叶连翘的种植

篇一 贯叶连翘的种植
贯叶连翘栽培技术

　　贯叶连翘为藤黄科金丝桃属植物，又名千层楼、小对叶草、赶山鞭等。以干燥地上部分入药，味苦涩，性平，具有舒肝解郁、清热利湿、消肿止痛的功效。主要用于治疗情志不畅、气滞郁闷、关节肿痛、小便不利等症。分布于河北、山西、陕西、甘肃、新疆、山东、江苏、江西、河南、湖北、湖南、四川及贵州等地。据临床研究表明：其所含的活性成分金丝桃素对人的大脑具有调整作用，对中轻度精神抑郁症有显著疗效，无毒副作用，深受欧美市场欢迎。近几年来，全国各地掀起了提取金丝桃素的热潮，致使不少药农在采集野生资源时，只顾眼前利益，将其连根拔起，使野生资源遭到严重破坏。因此，人工种植贯叶连翘，保护生态资源迫在眉睫。现总结贯叶连翘栽培技术，以供参考。

　　一、选地与整地

　　1.选地

　　贯叶连翘喜阳光、湿润，适宜在海拔1000～1500米的坡地种植，对土壤要求不严，二荒地也适宜栽种，路旁、房前屋后均可种植。

　　2.整地

　　土地深翻细整，拣尽石头、杂草、树根；每667平方米（1亩）施厩肥1吨，磷肥25公斤，整平耙细，做畦。一般畦宽120厘米，畦沟宽30厘米，沟深15厘米，畦面呈瓦背形，四周开好排水沟，待播。干旱地区，要在耕前灌水，以保证土壤湿度。或者在早春趁墒情较好时整地后进行覆盖保墒。

　　二、繁殖

　　1.种子繁殖

　　可采用直播或育苗移栽，生产上以直播为主。选择生长健壮、多分枝、花果量大的植株作为采种母株。因种子细小，蒴果在植株上开裂后不易收集，因此必须适时采收。一般于每年9月下旬至10月上旬，待蒴果变干、变褐时连同果实一起采收，再晾晒、轻击、脱粒、净种，用湿沙土层积储藏备用。播种时应将种子与拌有草木灰的沙土混匀播种。于立冬前后或在春季播种。在海拔1200米左右的地区，每年4月下旬播种。采用条播或撒播均可，以条播为主。条播便于苗期田间管理，在整好的畦面上按沟深3～5厘米、沟宽10厘米、行距20厘米开沟，将种子均匀地播入沟内；覆土要浅，一般播后覆膜的覆土0.5厘米，不覆膜的覆土1～1.5厘米；播种量为每667平方米0.3～0.4公斤。播后7～10天即可出苗。当苗高3～7厘米时，按株距10～15厘米间苗补植，间去过密苗、弱小苗及病虫苗。或丛植，每丛3～5株，丛间距20～25厘米，每667平方米留苗15000株左右。

　　2.分株繁殖

　　贯叶连翘分蘖能力较强，可在冬季或春季从老株边挖取带根的分蘖苗栽种，每株应有1～2个芽，一般应选阴雨天进行[

　　三、田间管理

　　1.中耕除草

　　贯叶连翘第1年生长缓慢，须中耕除草5次。第1次结合匀苗进行，第2、3、4、5次分别在5、7、9、11月进行。以后每年都可中耕除草4次，分别在3、5、7、10月进行。

　　2.施肥

　　苗高30厘米左右追肥，每667平方米施稀人畜粪水1吨；6～7月再进行2次追肥，每667平方米每次施尿素5公斤。要控制氮肥施用量，增施磷、钾肥。合理密植，以防倒伏。在贯叶连翘的生长过程中，忌用任何农药。

　　四、采收加工

　　1.采收

　　药用贯叶连翘为其地上部分全草，一般每年可采收2次，第1茬在6～7月花前期采收，用利刀割取地上部分，忌将根带起，以保证每年都有药材收获，采后及时追肥、培土，以促发新枝；第2茬在10月中下旬采收，具体时间随气候和海拔、温度不同而定。一般以蕾期至将开放时质量最好，在盛花期金丝桃素含量最高，花后质量下降。采收时注意戴好手套，避免眼和外露的皮肤与植株接触。

　　2.加工

　　新鲜植株必须在采集之后立即加工。应防止光照，将植株打成捆，然后干燥，以微温干燥为好。天气温和条件下，可将植株铺在平板上干燥或通风处阴干。将打捆的贯叶连翘用布袋包装，放于干燥通风处，注意防潮、防蛀。

　　（湖北省农科院中药材研究所 甘国菊 邮编：445000）

篇二 贯叶连翘的种植
贯叶连翘

1、简介

时采割，阴干或低温烘干。 贯叶连翘 本品为藤黄科植物贯叶金丝桃HypericumperforatumL.的干燥地上部分。夏、秋二季开花

1、1中药材简介

【性状】 本品茎呈圆柱形，长lO～100cm，多分枝，茎和分枝两侧各具一条纵棱，小枝细瘦，对生于叶腋。单叶对生，无柄抱茎，叶片披针形或长椭圆形，长1～2cm，宽O.3～O.7cm，散布透明或黑色的腺点，黑色腺点大多分布于叶片边缘或近顶端。聚伞花序顶生，花黄色，花萼、花瓣各5片，长圆形或披针形，边缘有黑色腺点；雄蕊多数，合生为3束，花柱3。气微，味微苦涩。

【鉴别】 (1)本品叶表面观：叶上表皮细胞多角形，细胞壁连珠状增厚；叶下表皮细胞多角形，垂周壁波状弯曲，略呈连珠状增厚，气孔平轴式或不定式。黑色腺点由一团分泌细胞组成，细胞内容物红色；半透明腺点为分泌囊结构，由1层上皮细胞包围圆形腔隙构成，内含油状物。

(2)取本品粉末O.1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取贯叶金丝桃对照药材O.1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯一甲酸(25：1)为展开剂，展开，取出，立即置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取金丝桃苷对照品、芦丁对照品，分别加甲醇制成每1m1各含o.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取[鉴别](2)项下的供试品溶液和上述对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】 水分 不得过12.O％(附录ⅨH 第一法)。

【含量测定】 照高效液相色谱法（附录VID）测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.1％磷酸溶液(16：84)为流动相；检测波长为360nm。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1m1含32μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约O.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用60％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含金丝桃苷(C21H20012)不得少于O.10％。

【性味与归经】 辛，寒。归肝经。

【功能与主治】 疏肝解郁，清热利湿，消肿通乳。用于肝气郁结，情志不畅，心胸郁闷，

关节肿痛，乳痈，乳少。

【用法与用量】 2～3g。

【贮藏】 置干燥处。

1、2植物简介

贯叶金丝桃，拉丁名Hypericum perforatum L.藤黄科金丝桃属多年生草本，高20-60厘米，全体无毛。茎直立，多分枝，茎及分枝两侧各有1纵线棱。叶无柄，彼此靠近密集，椭圆形至线形，长1-2厘米，宽0.3-0.7厘米，先端钝形，基部近心形而抱茎，边缘全缘，背卷，坚纸质，上面绿色，下面白绿色，全面散布淡色但有时黑色腺点，侧脉每边约2条，自中脉基部1/3以下生出，斜升，至叶缘连结，与中脉两面明显，脉网稀疏，不明显。花序为5-7花两岐状的聚伞花序，生于茎及分枝顶端，多个再组成顶生圆锥花序；苞片及小苞片线形，长达4毫米。萼片长圆形或披针形，长3-4毫米，宽1-1.2毫米，先端渐尖至锐尖，边缘有黑色腺点，全面有2行腺条和腺斑，果时直立，略增大，长达4.5毫米。花瓣黄色，长圆形或长圆状椭圆形，两侧不相等，长约1.2毫米，宽0.5毫米，边缘及上部常有黑色腺点。雄蕊多数，3束，每束有雄蕊约15枚，花丝长短不一，长达8毫米，花药黄色，具黑腺点。子房卵珠形，长3毫米，花柱3，自基部极少开，长4.5毫米。蒴果长圆状卵珠形，长约5毫米，宽3毫米，具背生腺条及侧生黄褐色囊状腺体。种子黑褐色，圆柱形，长约1毫米，具纵向条棱，两侧无龙骨状突起，表面有细蜂窝纹。花期7-8月，果期9-10月。

产河北、山西、陕西、甘肃、新疆、山东、江苏、江西、河南、湖北、湖南、四川及贵州。生于山坡、路旁、草地、林下及河边等处，海拔500-2100米。南欧、塞浦路斯、非洲西北部、近东、中亚、印度至蒙古和苏联也有。模式标本采自欧洲。（中国植物志对此植物记录于1990年，所以部分数据与现在的数据有所差距）

2栽培技术

2.1采收种子和种子处理

选择生长健壮、多分枝、花果量大的植株作为采种母株。因种子细小，蒴果在植株上开裂后不易收集，因此必须适时采收。一般于每年9月下旬至10月上旬，待蒴果变干、变褐时连同果实一起采收，再晾晒、轻击、脱粒、净种，用干净沙子按1∶10比例充分混匀后拌水,在湿度60%～70%条件下进行冷处理（0-8℃储存）,等翌春播种。

2.2整地施肥

（1）贯叶连翘喜阳光、湿润，适宜在海拔1000～1500m的坡地种植，对土壤要求不严，二荒地也适宜栽种，路旁、房前屋后均可种植。选择光照充足、排水良好、疏松的地块,土地深翻细整，拣尽石头、杂草、树根，施厩肥每公顷15吨、磷肥每公顷375kg，整平耙细，做畦，一般畦宽120cm，畦沟宽30cm，沟深15cm，畦面呈瓦背形，四周开好排水沟，待播。干旱地区，要在耕前灌水，以保证土壤湿度。或者在早春趁墒情较好时整地后进行覆盖保墒。

（2）宜选择向阳、土壤肥沃、疏松湿润的沙壤土,播种前深翻,施足基肥,每亩施腐熟农家肥2500kg、复合肥50kg或硫酸钾20kg,整细耙平,做成宽1.5～2m、高20cm的高畦,畦长视地形而定,畦间开排水沟约30cm,兼做作业道。

注：其他施肥方式

（1）腐熟农家肥每公顷30-45吨。

（2）尿素每公顷200kg

2.3种子繁殖

（1）可采用直播或育苗方式移栽。生产上以直播为主。播种时应与拌有草木灰的砂土混匀播种。于立冬前后或春季播种，采用条播或撒播均可，以条播为主，便于苗期田间管理，在整好的畦面上按沟深3～5cm、沟宽10cm、行距20cm开沟，将种子均匀地播入沟内，覆土要浅，一般播后覆膜的覆土0.5cm，不覆膜的覆土1.0～1.5cm；播种量为

4.5~6.0kg/hm。播后7～10d即可出苗。当苗高3～7cm时，按株距10～15cm间苗补植，间去过密苗、弱小苗及病虫苗。或丛植，每丛3～5株，丛间距20～25cm，留苗22.5万株/hm左右。 22

（2）由于种子细小，可将种子与草木灰按一比一百混合播种，播种量每公顷50kg，播种后不覆土，上盖遮阳网，每5天浇一次水，15天后可以出苗。

（3）3月中下旬，待土壤解冻后播种，播种量每公顷4-6kg，按株行距各25cm的规格开深2～3cm的穴，将与沙混匀的种子均匀撒在穴里，要求每穴有种子10～13粒。

（4）一般在3～5月播种,撒播或条播。播种前将种子用40℃的温水浸泡10小时,捞出摊于盆内或放在纱布袋中,置温暖处催芽。每天浇水1～2次,待芽萌动时即可播种。将畦面整平、耙细,条播按15～20cm宽开浅沟。由于贯叶连翘种子细小,又具光敏特性,所以播种时应与拌有草木灰的沙土混匀播种,每亩用种子0.3～0.4kg。播后不覆土,轻施人畜粪水,浇透水后盖树叶或草保墒,7～10天后即可出苗。出苗后撤去覆盖物。于翌年4月上旬,在整好的畦面上按株、行距25×30cm开穴,每穴栽苗5～6株,边挖边栽,栽后及时浇水。

2.4分株繁殖

贯叶连翘分蘖能力较强，可在冬季或春季从老株边挖取带根的分蘖苗栽种，每株应有1～2个芽，一般应选阴雨天进行，并尽量多带泥土，随分随栽，以提高移栽成活率。

栽种方法：在整好的畦面上，按行距20～25cm的规格开横沟或直沟，沟深可根据种苗大小而定，将分株苗均匀地放入沟内，株距15～20cm，用开第二沟的沟土覆于第一沟的种苗上，压实，栽后浇1次透水，栽植时若植株已展叶，应将叶片露出土表。

2.5田间管理

2.5.1及时匀苗补苗

播种后经20～30d即可出苗,当苗高3～7cm时匀苗、补苗,株距15～20cm。

2.5.2中耕锄草

贯叶连翘出苗后第1年生长缓慢,应及时中耕锄草,第一次锄草结合匀苗进行,以后在

5月至10月每隔20d左右各锄草一次。第2年5月份杂草发芽后中耕锄草一次,以后视杂草生长情况随时锄草。

2.5.3适时追肥

（1）贯叶连翘除一次性施足底肥外,还需适时追肥。追肥时间一般在栽植当年7月份及以后每3月份未发芽前。第一次追肥结合中耕锄草进行,可视地块肥力情况,配施氮素化肥75kg/hm左右,以满足生长需要;以后每年在3月份沟施充分腐熟的农家肥30t/hm。 （苗高30cm左右可追肥，施农家肥每公顷15吨，生长3-4个月后再进行两次追肥，每次施尿素每公顷75kg。）

（2）分别追施

促根肥：移栽后15天,进行第1次追肥,以利发根。以氮肥为主,亩用尿素10kg、复合肥20kg。穴施,施肥深5～6cm,施后覆土。

发棵肥：在正常情况下,贯叶连翘在移栽后第2年的农历3月底开始开花,此时要摘除部分花蕾并剪除病枝和不开花的空枝条,以促进植株发棵分枝。为使植株复壮,应追施第2次肥,此时以氮肥和有机肥为主。每亩用尿素10kg、人畜粪水1000kg,选晴天午后施入。 促花肥：农历4～5月为贯叶连翘盛花时期。在现蕾时,追施第3次肥,以促进植株现蕾开花。以磷、钾肥为主。用量为42%以上的复合肥20～25kg/亩,于阴雨天撒施。同时每隔7天用2%的磷酸二氢钾溶液喷施,进行根外施肥,每次250g,连续3～4次,可使花蕾大而多。 注：生长过程中忌用任何农药，整个生长周期，前期追肥应该一氮肥为主，促进植株生长，后期增施磷钾肥，促进开花。

2.5.4合理灌排

（1）贯叶连翘移栽后,要保持土壤湿润,以利缓苗和发根,尤其是孕蕾期后,一定要保证充足的水分,追肥后也要及时灌水。

（2）灌水方式以浇(淋)灌为主。灌水量视降雨量和田间湿度而定,一般田间土壤含水量应控制在15%左右。否则,容易造成烂根。

2.5.5打顶

贯叶连翘大田生长阶段在摘花蕾叶片时,一定要去除病枝和空枝并打顶,控制顶端生长,以促使多发新枝,具体时间和次数视生长情况而定。一般第1次打顶在农历3月中旬,第2次在4月中旬,第3次在5月上旬,过迟则会影响花蕾形成。打顶宜在晴天植株上的露水干后进行。第1次应重打,用手摘或用镰刀割去主干和主侧枝5～8cm,留25cm高;第2次和第3次则应轻打,摘分枝顶芽2～5cm,每次打顶或摘除的贯叶连翘花头应集中带到田外处理。 22

3采收加工

3.1采收

药用贯叶连翘为其地上部分全草，药材一般每年可采收2次，第1茬在6—7月花前期采收，用利刀割取地上部分，忌将根带起，以保证每年都有药材收获，采后及时追肥、培土以促发新枝；第2茬在10月中下旬采收，具体时间随气候和海拔、温度不同而定。一般以蕾期至将开放时质量最好，在盛花期金丝桃素含量最高，花后质量下降，采收时注意戴好手套，避免眼和外露的皮肤与植株接触。

注：贯叶连翘植株盛花期才含有金丝桃素,所以,只能在盛花期收获,不能提早或推迟。

3.2加工

新鲜植株必须在采集之后立即加工，应防止光照，将植株打成捆，然后干燥，以微温干燥为好，将植株铺在平板上干燥或通风处阴干。

3.3贮藏

将打捆的贯叶连翘用布袋包装，放于干燥通风处，注意防潮、防蛀。

4病害及其防治方法

4.1根腐病

4.1.1发生特点

以微胶镰孢为主要病原，主要病原由光孢镰孢、半裸镰孢和其他几种镰孢复合侵染导致的一种病害。5~11月发生，6~7月危害严重。植株发病初期，须根、支根变褐、腐烂，逐渐向主根蔓延，最后导致全根腐烂，外皮变黑色，随着根部腐烂程度的加剧，地上茎叶自下而上枯萎，最终全株枯死。拔出病株，可见主根上部和茎地下部分变黑色，病部凹陷，纵部病根维管束呈褐色。

4.1.2防治方法

①合理轮作，可抑制土壤中病菌的积累，特别是与葱蒜类蔬菜轮作效果更好。②加强栽培管理，采用高垄深沟栽培，防止积水，避免大水漫灌，发现病株及时拔除。③栽种前用50%多菌灵或70%甲基托布津1000倍液或75%百菌灵600倍液，每隔10d喷1次，连续喷2~3次，注意喷洒茎基部。

4.2根结线病

4.2.1发生特点

由根结线虫属的多种线虫引发，致使丹参根部生长出许多瘤状物，植物生长矮小，发育缓慢，叶片褪绿，逐渐变黄，最后全株枯死。拔起病株，须根上有许多虫瘿的瘤，瘤的外面黏着土粒，难以抖落。根线结虫在土中越冬，借流水、病肥、病种苗及农事作业传播，病土和病残体是主要侵染来源。幼虫侵入幼根后固定寄生，刺激组织膨大形成根结，幼虫经4个龄期发育成虫后交配产卵，孵化后的幼虫又再侵染，30~50d完成1代。该线虫随病残体在土中可存活2年。高温多湿、沙壤土中发病重。

4.2.2防治方法

①实行轮作，同一块地种植贯叶连翘、独活不能超过2个周期，最好与禾本科作物玉米、小麦等轮作。②结合整地进行土壤处理，方法同大田土壤处理。

篇三 贯叶连翘的种植
连翘与贯叶连翘的本草考证

【贯叶连翘的种植】

篇四 贯叶连翘的种植
十种世上最具安神镇静的植物!

十种世上最具安神镇静的植物！

薰衣草（lavender）：原产地由地中海地区(如西班牙、葡萄牙)、南至热带非洲、东至印度，包括加那利群岛、非洲北部和东部、欧洲南部、地中海地区、阿拉伯半岛和印度等地区。

西番莲（Passion flowers）：原产于巴西，巴拉圭，1610年间传入欧洲，当时西班牙传教士发现其花部的形状极似基督之十字架刑具，柱头上3个分裂，极似3根钉，花瓣红斑、恰似耶稣头部被荆棘刺出血形象，5个花药，恰似受伤伤痕，西班牙人以Passioflos

名之，直译之为受难花。

红景天（学名：Rhodiola rosea L.），别名：蔷薇红景天，扫罗玛布尔（藏名）等：分布于黑龙江、吉林、西藏及云南西北部、宁夏、甘肃、青海、四川、西藏等地；在欧洲北部至苏联、蒙古、朝鲜、日本亦有分布。

南非醉茄，也称为印度人参（Ashwagandha），也有叫冬樱花，催眠睡茄。虽然其学名为“南非醉茄”

，其实它却是印度土生土长且随处可见的地道药材。南非醉茄被公认

拥有显著的抗氧化能力和增强免疫力的。此外，南非醉茄已被用于诱导睡眠。

缬草（拉丁学名：Valeriana officinalis L.）败酱科，缬草属多年生耐寒、开花、草本植物，原产於亚洲部分地区和欧洲，北美洲有栽培。

西洋甘菊因能够治愈附近草木的疾病，自古被尊称为“植物的医生”。“Chamomile”的名称，具有希腊语“地上苹果”的意思。

香荚兰（学名：Vanilla fragrans (Salisb.) Ames）：攀援植物，产于中美洲，主要分布在南北纬25°以内，海拔700米以下地区。商业性生产仅限于墨西哥、马达加斯加、科

摩罗群岛、留尼汪、印尼等热带海洋地区，塞舌尔、毛里求斯、波多黎各、斯里兰

卡、塔希提、汤加、乌干达、印度等地也有少量栽培。中国1960年从印尼引种香荚兰成功之后，先后在福建、海南和云南栽培成功。

贯叶连翘， 又名金丝桃、圣约翰草 St John's wort（学名：Hypericum perforatum），

属金丝桃科，金丝桃属，是欧美的常用草药。

香蜂花（学名：Melissa officinalis L.）：多年生草本，原产俄罗斯及中亚各国，伊朗

至地中海及大西洋沿岸。中国民间有引种栽培。

篇五 贯叶连翘的种植
茉莉酸甲酯_MeJA_对贯叶连翘_省略_细胞生长和贯叶金丝桃素产量的影响_王保军

DOI:10.13592/j.cnki.ppj.2008.04.035

植物生理学通讯 第44卷 第4期，2008年8月669

茉莉酸甲酯(MeJA)对贯叶连翘悬浮细胞生长和贯叶金丝桃素产量的影响

王保军1, 张秀清1, 孙立伟1, 刘晓娜2, 张京声1, 孙君社1,*

中国农业大学1食品科学与营养工程学院, 2水利与土木工程学院, 北京100083

提要: 培养基中添加100 µmol·L-1 MeJA后, 贯叶连翘悬浮细胞生物量增加量和贯叶金丝桃素(HF)的产量分别是未经MeJA处理的1.3倍和1.73倍; 培养3 d时, 培养基中添加100 µmol·L-1 MeJA能提高HF产量, 是未经MeJA处理的2.4倍。关键词: 贯叶连翘; 贯叶金丝桃素; 悬浮细胞; 茉莉酸甲酯

Effect of Methyl Jasmonate on Suspension Cells Growth and Hyperforin Pro-duction of Hypericum perforatum L.

WANG Bao-Jun1, ZHANG Xiu-Qing1, SUN Li-Wei1, LIU Xiao-Na2, ZHANG Jing-Sheng1, SUN Jun-She1,*

1

College of Food Science and Nutritional Engineering, 2College of Water Conservancy and Civil Engineering, China Agricultural

University, Beijing 100083, China

Abstract: The results showed that the application of 100 µmol·L-1 methyl jasmonate (MeJA) could promote theaccumulation of biomass and hyperforin (HF) contents in suspension cells, which were 1.3 times and 1.73times higher than those in untreated suspension cells, respectively. Furthermore the production of HF weresignificantly improved, which were 2.4 times higher than those in untreated suspension cells, when suspensioncells were treated with 100 µmol·L-1 MeJA after incubated for 3 days.

Key words: Hypericum perforatum L.; hyperforin; suspension cells; methyl jasmonate (MeJA)贯叶金丝桃素(hyperforin, HF)是贯叶连翘中的主要成分之一, 它具有抗抑郁(Chatterjee等1998)、抗肿瘤(Schempp等2002)、抗菌(Beerhues 2006)、抗炎症和抗血管形成的作用, 能通过加强神经系统中神经传递体的释放来调节神经系统(Medina等2006), 因此越来越受到人们的关注。大田种植的贯叶连翘容易受到病虫害、微生物和季节的影响,产量和其中有用成分的含量不稳定(Murch等2000;Southwell和Bourke 2001)。植物组织培养技术可以大量培养贯叶连翘细胞, 保证细胞生物量的增加,还可以改变培养条件(Kirakosyan等2000)以调控和提高细胞内目的产物的含量。

茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)作为一种能够促进植物进行细胞防御应答和次级代谢产物合成的化学诱导子, 对植物次级代谢物的生成有明显促进作用(Ketchum等1999; 曲均革等2006; 罗建平等2006)。Sirvent和Gibson (2002)的研究表明,在贯叶连翘小植株生长过程中添加200 µmol·L-1MeJA可显著提高植株内金丝桃素类物质的含量, 同时植株内HF的含量也提高; Conceicao等(2006)的研究表明, 经MeJA诱导的贯叶连翘悬浮细胞中一

收稿资助 *【贯叶连翘的种植】

2008-04-03

修定

2008-05-28

国家自然科学基金(20506029)。

通讯作者(E-mail: sunjsh61@163.com; Tel: 010-62737501)。

系列类黄酮如倒捻子素、芒果苷、异槲皮素和毛地黄黄酮的含量增高。

本文探讨MeJA对贯叶连翘悬浮细胞的生物量和HF积累的影响。

材料与方法

实验材料为从贯叶连翘(Hypericum perforatumL.)种子获得的贯叶连翘组培苗。培养基为MS+3%蔗糖+0.6%琼脂。取生长25 d的组培苗上部幼嫩叶片诱导生成愈伤组织, 培养基为: 1/2 N(硝酸钾+硝酸铵) MS培养基+0.4 mg·L-1 2,4-D; 培养温度为(25±1) ℃; 光照时间为16 h·d-1; 光照强度为40 µmol·m-2·s-1。培养25 d将愈伤组织继代在新鲜的继代培养基[1/2 N (硝酸钾+硝酸铵) MS+0.4 mg·L-1 2,4-D+0.1 mg·L-1 KT]上, 连续继代3次。取0.2 g结构疏松、性状均一和生长快的愈伤组织,

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放入装有30 mL液体培养基[1/2 N (硝酸钾+硝酸铵) MS+0.4 mg·L-1 2,4-D+0.1 mg·L-1 KT]的100 mL三角瓶中, 摇床振荡暗培养。培养条件: (25±1) ℃,转速120 r·min-1, 旋转半径12 mm。悬浮细胞每隔10 d继代一次, 接种量按新鲜培养基与原培养基的比例为3:1。实验所用贯叶连翘悬浮细胞已经过33代的继代培养, 具有稳定的形态特征和生长速率。

MeJA用DMF (二甲基甲酰胺)溶解, 配制成100 µmol·mL母液, 以0.45 µm的滤膜过滤除菌。分别将母液加到培养液中, 配制为50、75、100和125 µmol·L-1的培养液。

测定HF时, 取稳定期悬浮细胞, 离心(9 600×g,10 min), 沉淀经真空冷冻干燥24 h后碾碎成粉末状, 称取0.5 g粉末, 加入9.8 mL色谱甲醇和0.2mL吡啶。冰浴中超声波(JY-II超声波细胞粉碎机,宁波新芝科器研究所)破碎提取, 超声条件为: 超声时间10 s、间隙时间10 s、功率300 W、超声次数30次。然后9 600×g冷冻离心15 min, 取上清液经过0.45 µm有机系滤膜过滤后进行高效液相检测(刘晓娜等2007)。整个过程尽量在避光和低温下进行, 以避免提取物的光和热分解。用Agilent1200系列高效液相色谱仪分析检测, 色谱柱为Agilent XDB-C18 (4.6 mm×150 mm, 5 µm); 检测器为G1314B可变波长检测器; 进样量为20 µL。流动相75%乙腈(色谱纯, Fisher)和25%水相(乙酸-三乙胺缓冲液, pH 6.5), 流速1 mL·min-1, 检测波长为290 nm。

以甲醇(色谱纯)溶解贯叶金丝桃素标品(HF, ≥97.0%, 德国Alexis公司), 配制HF (2.5、5、10、15、20、25、50、75和100 µg·mL-1)标准溶液。峰面积与标准溶液的标准方程为: Y=13.833X-16.118, 相关性R2≥0.999 [Y为峰面积, X为HF的浓度(µg·mL-1)]。

经处理的贯叶连翘悬浮细胞冷冻离心(9 600×g, 10 min)去除上清液, 收集细胞沉淀, 真空冷冻干燥24 h, 至恒重后, 称干量。

按公式: HF产量=细胞干重(g·L-1)×HF含量(mg·g-1),计算HF产量。

实验数据均采用SAS 8.0 (Anova)进行差异显著性分析(α=0.05)。

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结果与讨论

1 贯叶连翘细胞的生长和HF合成

(1)图1显示, 贯叶连翘悬浮细胞的生长周期为14 d, 2~5 d内细胞分裂生长快; 培养第8天细胞生物量达到最大; 之后细胞进入稳定期, 随着培养基中糖类和一些营养成分的消耗, 细胞分裂生长减慢,

生物量基本上保持稳定; 后期细胞出现凋亡现象, 再加上培养液随摇床的振动, 细胞裂解增加, 生物量略有下降。细胞培养10 d时转接入新鲜培养基中,其细胞生长延滞期较短。

图1 贯叶连翘悬浮细胞的生长和HF的积累Fig.1 Growth of H. perforatum suspension

cells and accumulation of HF

(2)细胞生长过程中, HF合成呈现一个动态的变化过程。由于用稳定期的细胞接种, 其细胞内的HF含量较高, 随着细胞生长的加快, HF的含量迅速下降。第4天的HF达到最低, 与悬浮细胞生长曲线相对应, 第4天时悬浮细胞生长最快, 生物量急速增加。随着培养时间的增加, 细胞生物量增加变慢, HF的含量开始增加。细胞生长到12~14 d时的HF含量达到最大(图1)。

2 MeJA对贯叶连翘悬浮细胞的生长和HF产量的影响

MeJA能促进贯叶连翘细胞内HF含量的积累(Sirvent和Gibson 2002)。

(1)不同浓度的MeJA对悬浮细胞生物量和HF产量的影响不同。较低浓度MeJA对贯叶连翘悬浮细胞生物量的影响不显著, 100 µmol·L-1 MeJA显著促进悬浮细胞生物量积累, 细胞干重是不经MeJA处理的1.3倍。高浓度MeJA对细胞生物量积累的促进不明显(图2-a)。

植物生理学通讯 第44卷 第4期，2008年8月671

图3 贯叶连翘悬浮细胞中HF的积累

Fig.3 Accumulation of HF in H. perforatum suspension cells

级代谢产物的促进作用最明显(Qian等2004; 曲均革等2006)。本实验在悬浮细胞生长的第3天添加100 µmol·L-1 MeJA, 培养14 d测定悬浮细胞生物量的结果表明, MeJA显著的提高了细胞生物量, 是不经MeJA处理的1.1倍(图4-a)。细胞培养的第1、

图2 不同浓度MeJA对悬浮细胞生物量、

HF含量和产量的影响

Fig.2 Effects of different concentrations of MeJA on

contents of biomass, HF and the production

of HF in suspension cells

(2)不同浓度MeJA都能促进细胞内HF积累,浓度为75 µmol·L-1和100 µmol·L-1的MeJA显著促进HF的积累(图2-b、c), 后者的积累量最大。

3 MeJA诱导的贯叶连翘悬浮细胞内HF含量变化

随着培养天数的增加, 添加100 µmol·L-1 MeJA的悬浮细胞内HF的含量, 呈现先降后升的变化趋势(图3), 培养4 d的含量降到最低。培养8 d进入稳定期, 经MeJA诱导的悬浮细胞内HF含量达到最大, 比不经MeJA处理的提高1.73倍。培养14d不经MeJA处理的悬浮细胞中HF含量达到最大值。

4 不同时间添加MeJA对贯叶连翘悬浮细胞生长和HF产量的影响

在细胞生长的对数期, 添加MeJA对细胞内次

图4 培养后不同时间添加MeJA对悬浮细胞生物量、

HF含量和产量的影响

Fig.4 Effect of addding MeJA at different time on contents ofbiomass, HF and the production of HF in suspension cells

672植物生理学通讯 第44卷 第4期，2008年8月

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5和7天分别添加100 µmol·L-1 MeJA与第3天的细胞生物量增加差异不明显, 而第9和11天添加, 则加速细胞的凋亡和裂解, 以致细胞生物量比不经MeJA处理的略有降低, 但在统计学上没差异。细胞培养3 d时添加MeJA的HF含量和HF产量显著提高, 是未经MeJA处理的2.4倍。其他时间添加MeJA的HF含量有不同程度的提高, 培养1、7和9 d添加MeJA的产量也高于不经MeJA处理的HF产量(图4-b、c)。

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篇六 贯叶连翘的种植
贯叶连翘真假鉴别方法

西安盛兴生物科技有限公司

UV0.3%贯叶连翘提取物真假区分方法

方法一：（西安盛兴生物）

取适量（50mg左右）的贯叶连翘提取物，用分析甲醇20ml溶解在50ML的容量瓶中，充分溶解后查看颜色，纯天然提取的贯叶连翘应为茶红色。

如图：左边颜色为茶红色则是纯天然提取，右图出现黑色或者呈黑绿色，则

为添加色素的伪品。

方法二：（西安盛兴生物）贯叶连翘提取物中金丝桃素HPLC一，高效液相色谱法条件：

专栏：inertsil消耗臭氧物质-34.6×150毫米5μm的流速：1.0毫升/分钟

检测：588nm的

流动相：甲醇：acetomitrile：nah2po3（0.1mol/l）（300:50：50，V/V）的

灵敏度：0.01aufs

柱温：25℃

进样量：10μ升

二.解决的制备

1.标准的准备工作：

精密称取约2mg金丝桃素的标准置25毫升容积瓶。用甲醇：吡啶（9:1）溶解稀释至刻度。

2.样品制备：

精密称取约为200mg的贯叶连翘置25毫升容积瓶中，加流动相sonicate为1小时，冷却至室温。用流动相稀释到刻度，0.45μm的微孔滤膜过滤器过滤。注入液相色谱仪中，测定。

三.计算

保留时间约15分钟。用外标法计算含量。

结论：如检测出金丝桃素成分在0.08%左右则为真货，反之则为添加物。

备注：本方法为相关文献资料及我公司技术人员常年经验总结而得，以备参考。

西安盛兴生物科技有限公司质量部